NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）試劑盒 說明 技術文章
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NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）試劑盒
商品貨號：QS1002
英文名稱：NAD-Malate Dehydrogenase（NAD-MDH）Assay Kit
別名：NAD-蘋果酸脫氫酶試劑盒 NAD-MDH Kit NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）試劑盒 NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）測試盒
檢測方法：常量法
| 商品貨號： | 商品品牌： | 規(guī)格 | 基本售價 | 選擇規(guī)格 |
|---|---|---|---|---|
| QS1002-50 管/48 樣 | 50 管/48 樣 | ￥280.00元 |
產(chǎn)品詳細介紹
測定意義：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH分布于細胞質(zhì)和線粒體中。
測定原理：
NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。
產(chǎn)品說明書
貨號：QS1002 規(guī)格：50 管/48 樣
NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）試劑盒說明書 紫外分光光度法
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，線粒體中 MDH 是 TCA 循環(huán)的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中 MDH 催化草酰乙酸形成蘋果酸。 草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH 在細胞多種生理活動中 扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病 性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH 分為 NAD-依賴的 MDH 和 NADP-依賴的 MDH，細菌中通常只 含有 NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH 分布于細胞質(zhì)和線粒體中。
測定原理：
NAD-MDH 催化 NADH 還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致 340nm 處光吸收下降。
自備實驗用品及儀器：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一: 提取液 60 mL×1 瓶，在 4℃保存；
試劑二: 液體 50 mL×1 瓶，在 4℃保存；
試劑三: 粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前加入 300μ L 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的 試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
試劑四: 粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前加入 300μ L 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的 試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
樣本測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）：試劑一體積（mL）為 1000~5000：1 的比例（建議 2000 萬細菌或細胞加入 1mL 試劑一）， 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃ 離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 試劑一），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑二在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上。
3、操作表：
| 試劑名稱（μ L） | 測定孔 |
| 樣本 | 20 |
| 試劑二 | 760 |
| 試劑三 | 10 |
| 試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中，混勻后立即在 340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和反應 1min 后的吸光度 A2，計算 ΔA=A1-A2。
注意：若 A1-A2 大于 0.5，需將樣本用提取液稀釋，使 A1-A2 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。 計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。
NAD-MDH 活力單位的計算：
1、血清（漿）NAD-MDH 活力的計算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[Δ A×V 反總÷（ε ×d）×109 ]÷V 樣÷T=6430×Δ A
2、組織、細菌或細胞中 NAD-MDH 活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH （ nmol/min/mg prot ） =[Δ A×V 反 總 ÷ （ ε ×d ） ×109 ]÷(V 樣 ×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[Δ A×V 反總÷（ε ×d）×109 ]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T =6430×Δ A÷W
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個酶活力單位。 NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[Δ A×V 反總÷（ε ×d）×109 ]÷（2000×V 樣÷V 樣總） ÷T=3.215×ΔA
V 反總：反應體系總體積，8×10-4 L；ε ：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d： 比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應 時間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；2000：細胞或細菌總數(shù)，2000 萬。
系列產(chǎn)品及單價
| 輔酶Ⅰ系列 | ||||
| QS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 500 |
| MS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 920 |
| QS1001 | 乳酸脫氫酶（LDH）測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 170 |
| MS1001 | 乳酸脫氫酶（LDH）測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 330 |
| QS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
| MS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
| QS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
| MS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
| QS1004 | NADH氧化酶（NOX）測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 450 |
| MS1004 | NADH氧化酶（NOX）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 850 |
| QS1005-50 | 檸檬酸合酶(CS）測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
| QS1005-25 | 檸檬酸合酶(CS）測試盒 | 可見分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
| MS1005 | 檸檬酸合酶(CS）測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 3500 |
| QS1006 | 丙酮酸脫羧酶（PDC）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 720 |
| MS1006 | 丙酮酸脫羧酶（PDC）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
| QS1007 | 醇脫氫酶（ADH）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
| MS1007 | 醇脫氫酶（ADH）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
| QS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 800 |
| MS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1550 |
| QS1009 | 乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 420 |
| MS1009 | 乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 800 |
| QS1010 | NAD激酶（NADK）測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 600 |
| MS1010 | NAD激酶（NADK）測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1100 |
| QS1011 | 線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 1280 |
| MS1011 | 線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 2500 |